常见技术问题答疑

26,6, 2018

AAV不同血清型感染特性总结


参考文献:

1. Adeno-associated virus serotypes for gene therapeutics, Current Opinion in pharmacology, 2015,

2. Systemic delivery of adeno-associated viral vectors, Current opinion in virology, 2016,


根据病毒衣壳的不同,研究人员发现了十多种不同的血清型,以及超过100种病毒变异体。


AAV2是人类发现早、研究早的血清型,经过几十年的研究,AAV2是研究得清楚的血清型。AAV2作为临床医学上的载体虽然没有病性和低免疫性,但是A它对很多组织和细胞的感染效率不高,而影响其感染能力的主要是其病毒衣壳,也就是血清型,大量研究表明,不同血清类型的AAV对不同物种,不同组织器官有不同的感染效率


表1,详细总结了有关AAV血清型与感染特性的关系,来自文献Adeno-associated virus serotypes for gene therapeutics, Current Opinion in pharmacology


表2,经过笔者翻译整理有关AAV血清型与感染特性的汇总表格。


有研究人员发现,在小鼠尾静脉直接将病毒注射入血液是一种较高效率的系统给药方式,通过尾静脉注射不同血清型病毒,比较血液代谢及感染。


表3,比较AAV1,2,6,7,8,9在尾静脉注射的特点,来自文献Systemic delivery of adeno-associated viral vectors, Current Opinion in Virology


表4,经过笔者翻译整理有关AAV1,2,6,7,8,9系统注射的比较。


我们可以发现在啮齿类中,系统注射AAV1,7,8,9病毒,都具有较强的感染能力,尤其AAV9血清型病毒在现阶段系统注射啮齿类动物具有潜力。

对不同的血清型AAV进行改造:

以人2型腺相关病毒为例,基因组为4681个核苷酸的单链DNA,基因组的两末端为145 bp的倒转末端重复序列(inverted terminal repeat,ITR),是AAV整合、复制、拯救和包装所必须的顺式作用元件,并具有转录启动子的活性。

ITR序列之间为病毒编码区,含有两个开放阅读框架,分别表达Rep和Cap蛋白。AAV载体为复制缺陷型病毒,只有在辅助病毒(腺病毒或疱疹病毒)共同感染条件下才能复制包装发生产毒性感染。通常所采用的方法是杂合子改造,即利用携带有目的血清型的cap和Rep基因的辅助包装质粒、腺病毒(或疱疹病毒)辅助质粒以及含有AAV2 ITR(两个末端倒转重复序列)及目的基因表达单位的AAV载体质粒三质粒一起转染293T细胞,可获得重组AAV。



021-59923117

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