逆标载体

26,6, 2018

AAV2/2Retro 逆标病毒

参考文献:Alla Neuron (2016)


2016年9月份Neuron报道了Alla Y. Karpova实验室D. Gowanlock R. Tervo等人的工作,他们通过In Vivo文库筛选的方法获得了一种新的AAV血清型,这种血清型对于神经元投射的逆向标记效率比经典血清型提高了100倍以上,甚至可以达到染料和Retrobead类似的逆标效率。更重要的是逆标过去的AAV可以轻松表达出所携带的目的基因,做以往很难实现的各种操纵。


我们来看看他们的实验结果:

在特异标记皮层第五层神经元的转基因CRE小鼠(Rbp4_KL100Cre)的脑桥基底核定位注射rAAV-retro-DIO-CAG-tdTomato和rAAV-CAG-EGFP病毒。rAAV-retro-DIO-CAG-tdTomato病毒会通过轴突逆行感染投射至注射位点的皮层第五层Cre阳性投射神经元细胞,从而使皮层-脑桥基底核投射表达红色荧光;rAAV-CAG-EGFP病毒感染注射位点的基底核的神经元胞体,进而使基地脑桥核-小脑投射表达绿色荧光。这样证明了两种病毒会特异的逆行与顺行感染。




aitool团队已按照文献提供的信息,构建了AAV2Retro血清型外壳,该外壳成功包装和纯化AAV-CAG-EGFP病毒,并验证了该血清型外壳的有效性。

验证实验中使用了AAV2/2Retro-CAG-EGFP病毒,在纹状体注射体积为200nL,滴度为2E+13VG/mL。(本次实验所用剂量过大,推荐剂量为本次实验的1/10,也就是注射量为20nL滴度2E+13VG/mL的病毒,或者200nL滴度2E+12VG/mL的病毒),观察上游神经元的感染情况:


所示,在注射位点(纹状体,striatum)大量细胞被病毒感染,而公认的纹状体的上游脑区,如皮层(cortex),丘脑(thalamus)和黑质(substania nigra)均发现被感染的神经元胞体,说明泰廷团队成功验证了AAV2/2retro病毒的确可以通过轴突感染神经元胞体的现象。



021-59923117

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