miRNAi载体

miRNAi-AAV载体,这是一种使用miRNA的骨架表达RNAi分子的特殊载体,目前已经广泛应用于体外的基因沉默实验。


这种载体的构建方法来源于2006年的一项研究[1],泰儿图研发中心将这套miRNAi系统成功的构建在AAV载体上,使得这套系统可以针对特定细胞在体内实现实现精准高效的基因沉默。miRNAi-AAV载体的敲减效率高,最大的优点是能被II型启动子启动,也就是表达mRNA的启动子,这样就可以用到细胞特异性表达的场景中。





在设计具体的载体时,泰儿图首先进行外源筛靶实验,也就是根据目的基因设计6个靶点,先接入到常规的载体上,跟目的基因的过表达质粒一起共转染,挑选出最有效的靶点,随后包装病毒。


下图为载体构建和体内注射流程:




该miRNAi-AAV载体带有mCherry红色荧光,被注射到了小鼠的大脑皮质中,同时通过免疫组化实验将目的蛋白X染上绿色荧光,观察荧光鉴定细胞特异性(星形胶质细胞)基因敲减效果。


实验结果如下图显示,miRNAi1和miRNAi12这2种miRNAi-AAV载体均显示了良好的基因沉默效果(第2、3行),miRNAi-AAV载体感染到的细胞(红色荧光)均实现了目的基因X(绿色荧光)的显著下调,而对照组(第1行,mCherry空载体)则未显示出抑制效果(所有红色荧光均与绿色荧光融合)。



该研究证明,泰儿图在国内率先推出的miRNAi-AAV载体可以在体内成功实现细胞特异性的基因沉默,为体内基因功能研究提供了强有力的武器。



参考文献

[1] Du, G., Yonekubo, J., Zeng, Y., Osisami, M., & Frohman, M. A. (2006). Design of expression vectors for RNA interference based on miRNAs and RNA splicing. FEBS J, 273(23), 5421-5427. doi: 10.1111/j.1742-4658.2006.05534.x





021-59923117

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