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细胞凋亡与突触抑制

细胞凋亡与突触抑制介绍

文字:[大][中][小] 2017-2-6    浏览次数:646    

细胞凋亡:


taCasp3-TEVp

由taCasp3与TEVp组成,其中taCasp3是由内源性caspase 3改造的来,TEVp是外源蛋白酶(tobacco etch virus protease)。caspase 3在细胞内一般处于前体状态(procaspase 3),当上游有激活信号时被修剪活性状态(如下图左),开启凋亡程序(apoptosis)。而我们使用的procaspase 3(pro-taCasp3)不能被内源信号修剪成活性状态,只能被外源TEVp修剪,成为活性状态(taCasp3),从而使活细胞开始凋亡程序。



参考文献:

Sexually Dimorphic Neurons in the Ventromedial Hypothalamus Govern Mating in Both Sexes and Aggression in Males, Cell, 2013


DTR-DTX

白喉毒素(Diphtheria toxin, DT)是含有两个二硫键的多肽链,分子量为62000。经蛋白酶水解后,可分为A和B两个片段,中间仍由二硫键联接。其中B片段无酶活性,但能与宿主易感细胞表面特异性受体(DT receptor, DTR)结合, 并通过易位作用使A片段进入细胞。 A片段具有酶活性,能将氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷(NAD+)水解为烟酰胺及腺嘌呤二磷酸核糖(ADPR)两部分,并催化延伸因子-2(Elongation factor-2,EF-2)与ADPR共价结合,使EF-2 失去转位活性,从而中止肽-tRNA及mRNA在核糖体上由受位转移至供位,肽链不能延长,细胞蛋白质合成受阻,细胞死亡。

经常使用的是DIO-DTR病毒,一般还会有GFP或者mCherry指示荧光,在注射后3周就可以使用DTX诱导杀细胞,从而研究目标细胞类群的功能。

参考文献:

Skilled reaching relies on a V2a propriospinal internal copy circuit, Nature, 2014


突触抑制:


TetTox

tetanus toxin (TetTox)破伤风毒素,它的轻链可以酶解突触囊泡蛋白VAMP2(vesicle associated membrane protein VAMP2,也称为synaptobrevin 2)。VAMP(synaptobrevin)是突触囊泡负责与突触前膜上Syntaxin,SNAP-25,Munc18等结合最重要的定位蛋白,如果被酶解后将使囊破无法与前膜融合,从而影响突触递质的释放。


                   


突触囊泡结合相关蛋白:



参考文献:

Reversible Suppression of Glutamatergic Neurotransmission of Cerebellar Granule Cells In Vivo by Genetically Manipulated Expression of Tetanus Neurotoxin Light Chain, The Journal of Neurosceience, 2003




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