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Tet-Off/Tet-On

Tet-Off/Tet-On

文字:[大][中][小] 2017-2-1    浏览次数:1240    

       Tet-off/Tet-on基因表达系统是新近发展起来的高效、无毒、具有严密开/关功能的基因表达系统。自推出以来,在很多方面得到了广泛的应用,尤其是在基因的表达调控及基因治疗上。


       简单地讲,大肠杆菌转座子Tn10中Tet阻遏因子(TetR)负性调节四环素抗性操纵子,TetR与四环素有很高的亲和性,在无四环素时,TetR与Tet操纵因子序列(TetO)结合而阻断四环素抗性基因的表达;当四环素存在时,TetR对TetO的阻遏接触,转录启动,从而调节基因的表达。


       在哺乳动物试验中,由表达TetR的质粒与另一个含有四环素调节元件(tetracycline-response element, TRE)和目的基因片段的质粒构成两个重要部分,后者上游为TRE,多克隆位点在TRE下游,并且无法单独启动外源基因的表达。


       在Tet-Off抑制系统中,TetR的第1~207个氨基酸与单纯疱疹病毒(HSV)VP16蛋白的C端127个氨基酸组成转录活化区域,融合表达Tet调控的转录激活子(tet-controlled transcriptional activator, tTA)。缺少四环素或者强力霉素时,tTA的TetR与TRE结合,激活目的质粒转录;在四环素或者强力霉素作用下,缺少增强子使目的基因表达量很低或无法表达。

       Tet-On激活系统与之很相似,只是其调节蛋白是反义的TetR (rTetR),由TetR中的4个氨基酸变化而形成,与VP16转录活化区域融合表达反义四环素激活子(reverse tetracycline transcriptional activator, rtTA)。四环素或者强力霉素存在时,rtTA与TRE激活下游目的基因表达;在四环素或者强力霉素缺失时,目的基因表达关闭。

参考文献:

Tet基因表达调控系统及其应用,中国医药生物技术,2007年8月第2卷第4期


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