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荧光示踪

GRASP与Synaptophysin

文字:[大][中][小] 2017-2-1    浏览次数:688    

GRASP


GRASP, GFP Reconstitution Across Synaptic Partners, 这项技术的目的是标记突触,原理是利用突触前与突触后的距离很近(不超过100 nm),这种距离近到足够使分别在前后膜表达的一个蛋白的两部分相互作用,发挥功能。

GFP蛋白被人为分成两部分,突触前后两个细胞分别编码。其中一个部分含有前214个氨基酸,形成前10个beta-barrel结构,这个蛋白被称为spGFP1-10。后一个部分含有是215-230共16个氨基酸,形成第11个barrel, 被称为spGFP11。当突触前膜表达的spGFP1-10与突触后膜表达的spGFP11空间距离足够近时,就会相互作用,组成一个完整的GFP结构,从而在488 nm激发光下被激活,可以检测到507 nm发射光。



参考文献:

GFP Reconstitution Across Synaptic Partners (GRASP) Defines Cell Contacts and Synapses

in Living Nervous Systems, Neuron, 2007


Synaptophysin


Synaptophysin是一种38k道尔顿,含有四个跨膜domain的突触囊泡糖蛋白,推测参与突触囊泡与突触前膜结合,将荧光蛋白与之结合表达,可以用作定位突触前。

突触囊泡结合相关蛋白:


 


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