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cre病毒

Cre-loxp系统

文字:[大][中][小] 2017-1-30    浏览次数:1336    

Cre-loxP是一种位点特异的基因重组技术,被广泛应用于特异位点的基因敲除、基因插入、基因翻转和基因易位,在真核生物和原核生物中均有广泛应用。


Cre-loxP的基本原理

Cre蛋白是一种重组酶,于1981年从P1噬菌体中被发现。Cre重组酶基因编码区序列全长1029bp,编码38kDa蛋白质,Cre重组酶是由343个氨基酸组成的单体蛋白。

LoxP位点,位于P1噬菌体中的34bp序列,由两个13bp的反向回文序列和8bp的中间间隔序列共同组成,间隔序列决定loxP的方向。


Cre-loxP诱导基因重组的几种方式

当细胞基因组内存在两个loxP位点时,一旦有Cre重组酶出现,就会诱导两个loxP位点间的序列发生重组。重组的结果取决于两个loxP位点的方向,主要有以下几种可能:

1.  如果两个loxP位点位于一条DNA链上,且方向相同,Cre重组酶能有效地敲除两个loxP位点间的序列(下图左);

2.  如果两个loxP位点位于一条DNA链上,但方向相反,Cre重组酶能诱导两个loxP位点间的序列翻转(下图中);

3.  如果两个loxP位点分别位于两条不同的DNA链或染色体上,Cre酶能诱导两条DNA链的交换或染色体易位(下图右)。

                                  


Cre-loxP系统的优点

在当今世界上,Cre-loxP系统是在神经系统中应用最广泛的条件性基因敲除工具,主要是因为该系统有如下优点:

1.  高效性:Cre重组酶与具有loxP位点的DNA片段形成复合物之后,可以提供足够的能力引发之后的DNA重组过程,重组过程简约高效;

2.  特异性强: loxP序列的唯一性,保证基因重组的特异性;

3.  可应用范围广:Cre重组酶是可以在生物体不同的组织、不同的生理条件下发挥作用;

4.  可由二型启动子启动表达:Cre重组酶的编码基因可由任何一种二型启动子驱动,由此保证Cre重组酶在生物体不同的细胞、组织、器官或者在不同的发育阶段或不同的生理条件下表达,从而实现较高的组织和细胞特异性。


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